酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）為免疫學(xué)中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，本詞條從定義、基本原理、分類(lèi)方法、操作要點(diǎn)等方面對(duì)其進(jìn)行了詳細(xì)介紹。

原理

1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無(wú)定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

進(jìn)展

親和素是一種糖蛋白，一分子親和素可以與四個(gè)生物素小分子發(fā)生專(zhuān)一親和作用，類(lèi)似抗原與抗體親和。它們之間的作用力是已知*強(qiáng)的非共價(jià)作用。80年代后，隨著生物素-親合素系統(tǒng)（BAS）作用被發(fā)現(xiàn)，這一親和作用被結(jié)合應(yīng)用到ELISA技術(shù)上，大大提高了后者反應(yīng)的靈敏性與專(zhuān)一性。生物素很易與蛋白質(zhì)（如抗體等）以共價(jià)鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應(yīng)，既起到了多級(jí)放大作用，又由于酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)的催化作用而呈色，達(dá)到檢測(cè)未知抗原（或抗體）分子的目的