大鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）酶聯(lián)免疫檢測

試劑盒使用說明書

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

用    途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）的測定。

工作原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）水平。向預(yù)先包被了大鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1），溫育；溫育后，加入生物素標記的抗SDF-1抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1．    37℃恒溫箱。

2．    標準規(guī)格酶標儀。

3．    精密移液器及一次性吸頭

4．    蒸餾水，

5．    一次性試管

6．    吸水紙

注意事項

1．    從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．    各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差

3．    嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

4．    為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

5．    不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

6．    底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作程序

1.       標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。）

2.       根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3.       加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗TNF-α抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul（標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加）；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗TNF-α抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

4.       配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.       洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.       顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

7.       終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

8.       測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

9.       根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

操作程序總結(jié)：

檢測范圍：30ng/L→1200 ng/L。

規(guī)格：96T/盒

保存：2-8℃。

有效期：6個月（2-8℃）。